Į ką atsižvelgti renkantis tinkamą mikroskopą gyvųjų ląstelių vaizdo gavimo sistemai

Norint sėkmingai atlikti gyvų ląstelių vaizdavimo eksperimentus, labai svarbu naudoti tinkamą metodą. Renkantis tinkamą mikroskopą gyvų ląstelių vaizdavimui, reikia atsižvelgti į šiuos aspektus: Mėginio gyvybingumas, vaizdo gavimo greitis (laikinė skiriamoji geba) ir reikalinga skiriamoji geba visais trimis matmenimis.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 etiketė) ir mažiausia šviesos dozė sužadinimui yra labai svarbi.

Eksperimentams su gyvomis ląstelėmis didelės spartos gavimas dažnai yra labai svarbus, ypač tiriant greitus dinaminius procesus, tokius kaip pūslelių stebėjimas. Naudojant optinius filtrus, apribojamas greitis, nes keičiant kiekvienos spalvos filtrų rinkinius, naudojamus kelių komponentų sąveikai tirti, būtina atlikti nuoseklų vaizdą. Vaizdams nuosekliai rinkti reikia daugiau laiko nei vienu metu renkant vaizdus, ​​todėl gavimo metu galima nepastebėti greitų mėginio judesių, nes kiekviena spalva turi ilgesnį laiko intervalą nuo vieno vaizdo iki kito. Be to, kai tiesioginis dviejų ar daugiau spalvų palyginimas yra labai svarbus, signalai galėjo judėti net tarp atskirų fluoroforų gavimo, o tai apsunkina duomenų interpretavimą.

Galimos kelios technologijos, leidžiančios laikui bėgant gauti 3 dimensijų vaizdus. Sistemos pasirinkimas priklauso nuo jūsų eksperimento ir nuo to, ar norint gauti norimą 3D skiriamąją gebą pirmenybė teikiama didesniam greičiui ar mažesniam mėginio apšvietimui vaizdavimo metu. Renkantis tinkamiausią sistemą, tradiciškai reikėjo pasirinkti tarp kameros arba konfokalinės gyvų ląstelių vaizdo sistemos, tačiau šiuolaikiniai sprendimai gali pateikti abu būdus integruotu būdu.